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    Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

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    Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

     

     

     

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    摘要:

    以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%

     

     

     

     

     

    一、样品前处理

    1、         所用试剂

    1、1        浓盐酸,浓度≥36%,优级纯

    1、2        6mol/L 盐酸:500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

    1、3        水:去离子水

    1、4        苯酚:须重蒸

    1、5        17种氨基酸标准品

    行号

    氨基酸

    行号

    氨基酸

    1

    Asp       

    天冬氨酸

    2

    Thr

    苏氨酸

    3

    Ser       

    丝氨酸

    4

    Glu

    谷氨酸

    5

    Pro       

    脯氨酸

    6

    Gly

    甘氨酸

    7

    Ala       

    丙氨酸

    8

    Cys

    胱氨酸

    9

    Val       

    缬氨酸

    10

    Met

    蛋氨酸

    11

    Ile        

    异亮氨酸

    12

    Leu

    亮氨酸

    13

    Tyr

    酪氨酸

    14

    Phe       

    苯丙氨酸

    15

    His

    组氨酸

    16

    Lys

    赖氨酸

    17

    Arg

    精氨酸




     

    2、         前处理设备

    1)     分析天平:感量分别为 0.0001g0.00001g

    2)     水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

    3)     匀浆机。

    4)     无油真空泵

    5)     干浴水解浓缩仪

    6)     移液管

    7)     0.22um滤膜

     

    3、         样品制备(参考国标GB 5009.124-2016

    原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。

     

    4、         试样水解

    称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用

     

    二、分析方法描述(Biochrom 30+

    氨基酸分析仪分析方法参数:

    1)     色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm

    2)     分离程序:

    NO.

    Time

    Temp

    Buffer

    Pump

    Nin

    Rec

    Commands

    1

    01:00

    48

    1

    35.0ml/h

    ON

    OFF


    2

    00:00

    48

    1

    35.0ml/h

    ON

    OFF

    Reset

    3

    01:00

    48

    1

    35.0ml/h

    ON

    OFF

    Load

    4

    06:40

    48

    1

    35.0ml/h

    ON

    ON


    5

    13:00

    52

    2

    35.0ml/h

    ON

    ON


    6

    01:00

    52

    5

    35.0ml/h

    ON

    ON


    7

    16:00

    95

    5

    35.0ml/h

    ON

    ON


    8

    04:00

    95

    6

    35.0ml/h

    ON

    ON


    9

    04:00

    95

    1

    35.0ml/h

    ON

    ON


    10

    09:00

    48

    1

    43.0ml/h

    OFF

    OFF


    11

    02:00

    48

    1

    35.0ml/h

    ON

    OFF


    End








     

    3)     运行时间:经分析时间+再生时间 57min

    4)     反应单元温度:135°C

    5)     检测波长:570nm440nm同时检测。

     

     

    三、样品中氨基酸含量的计算

       样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

    ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

    式中:

    ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

    Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

    As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

    cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)

     

    试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

    Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

    式中:

    Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

    ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

    F ———稀释倍数;

    V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

    M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

    m ———称样量,单位为克(g);

    109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

    100 ———换算系数。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    附、石斑鱼分析图谱及做样结果


     

     

     

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