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    核酸提取方法介绍

    核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编为你介绍一下几种核酸的提取方法。


    1.阴离子去污剂法

    蛋白质在SDS或二甲苯酸钠等去污剂的作用下变性,DNA能够直接从生物材料中提取,因为常常借静电引力或配位键结合来时细胞中DNA与蛋白质结合,而阴离子去污剂可以对这种价键起到破坏作用,因此,阴离子去污剂以常用于DNA的提取。


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    2.苯酚抽提法

    苯酚不仅能够作为蛋白变性剂,同时还能够对DNase的降解起到抑制作用,使用苯酚对匀浆液进行处理的时候,因为蛋白与DNA联结键已经断裂,又有很多与苯酚相似相溶的极性基团位于蛋白分子表面。DNA溶于水相,蛋白分子溶于酚相。离心分层后将水层取出,多次重复操作,再和含DNA的水相合并,利用醇不能够溶解核酸的性质,使用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。这种方法具有能够提取保持天然状态的DNA的特点。


    3.浓盐法

    利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度差异,分离两者。使用1M氯化纳提取抽提,使DNA粘液获得,加入含有少量辛醇的氯仿,振荡,使乳化,再离心将蛋白质除去,此时,蛋白质在水相及氯仿相中间停留,而DNA在上层水相中。DNA钠盐通过用2倍体积95%乙醇沉淀出来,或可以使用0.15MNaCL液将洗涤细胞反复洗涤,将RNA去除,再通过氯仿-异醇法将蛋白去除。比较这两种方法,第二种方法可能会降解更少的核酸。利用稀盐酸溶液对DNA进行提取的时候,将如SDS适量去污剂加入,对于蛋白质与DNA的分离很有帮助。在提取过程中,为了对组织中的DNase对DNA的降解作用有所抑制,在氯化钠溶液中,将柠檬酸钠加入作为金属离子的烙合剂,一般使用0.015M柠檬钠和15MNaCL,即为SSC溶液,用作DNA的提取。


    2019-08-13 17:23:17 浏览次数:151次

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