PCR的反应控制-葡京娱乐场APP - 葡京娱乐场APP_葡京娱乐场官网下载app下载_澳门新葡亰手机版登录网址

葡京娱乐场APP

<cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite>
  • <cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite>
  • <cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite><cite id="xz27z037ya"></cite>
  • 为您推荐:
    中国葡京娱乐场APP 中国葡京娱乐场APP 基因扩增仪 PCR的反应控制

    产品导购地图

    PCR的反应控制

    PCR技术是模拟体内DNA的天然复制过程,在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术,主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2倍。


    反应的控制

    ①PCR反应的缓冲液 提供合适的酸碱度与某些离子

    ②镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高,常用1.5mmol/L

    ③底物浓度 dNTP以等摩尔浓度配制,20~200umol/L

    ④TaqDNA聚合酶 2.5U(100ul)

    ⑤引物 浓度一般为0.1 ~ 0.5umol/L

    ⑥反应温度和循环次数

    13.jpg


    变性温度和时间 95℃,30s

    退火温度和时间 低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃

    延伸温度和时间 72℃,1min/kb(10kb内)

    Tm值=4(G+C) +2(A+T)

    循环次数 :一般为25 ~ 30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低,可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右,循环数超过30个以后,DNA聚合酶活性逐渐达到饱和,产物的量不再随循环数的增加而增加,出现了所谓的“平台期”。


    模板的制备

    PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。

    标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌,可用溶菌酶加EDTA处理。所得到的粗制DNA,经酚、氯仿抽提纯化,再用乙醇沉淀后用作PCR反应模板。


    2019-06-13 11:47:11 浏览次数:78次

    看过该文章的人还看了以下文章