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    核酸提取仪CTAB法

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    CTAB法是提取DNA主要的方法,其他方法还有生物方式:酶法,化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法,物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。


    分类

    细胞器DNA、细胞核DNA。

    单链环状、双链线性、双链环状。

    组织DNA、细胞悬液DNA、、病毒DNA、质粒DNA、真核生物DNA、细菌DNA。


    提取原则

    1.应当将如蛋白质、多糖和脂类分子等其他生物大分子的污染应降低到最低程度。

    2.应当尽可能去除如RNA的其他核酸分子。

    3.使核酸一级结构的完整性得以保证。

    4.不应当有对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子存在于核酸样品中。


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    提取方法

    1.表面活性剂快速制备法

    使用Triton X-100A或NP40表面活性剂对细胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚将蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。


    2.加热法快速制备

    温度96℃-100℃加热5min,之后离心后取上清,能够在PCR反应时使用。


    3.碱变性快速制备

    首先使用NaOH作用20min,再将HCI加入中和,离心后取上清,含有少量DNA。


    4.玻璃棒缠绕法

    使用盐酸胍对细胞进行裂解,在乙醇上铺上裂解物,然后在界面使用带钩或U型玻璃棒轻搅,在玻棒绕DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。


    5.异丙醇沉淀法


    6.酚抽提法

    首先使用蛋酶K、SDS对细胞进行破碎,化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb。


    7.甲酰胺解聚法

    和上面方法一样先将细胞破碎,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得200kb左右DNA。


    2019-08-12 17:50:56 浏览次数:47次
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