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    实验室用户必备:Thermo Fisher液相色谱仪、色谱柱如何维护?

    杭州携测信息技术股份有限公司    2019-09-10    液相色谱仪    浏览 41 次

    Thermo Fisher 液相色谱维护时间表


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    如何保证良好的柱性能与柱寿命?


    1. 认证阅读色谱柱使用说明书;使用填充良好的色谱柱;使用保护柱及在线过滤器;尽量减少压力波动,避免机械及热冲击。

     

    2. 经常以强溶剂冲洗色谱柱;充分过滤样品及流动相,尽量避免杂质微粒与强保留成分;用稳定的固定相(C18最稳定);在中等PH值操作(6~8),用有机缓冲溶液;色谱柱使用温度应当小于40℃。

     

    3. 硅胶基质的的色谱柱,应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0;在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠;流动相中含有缓冲溶液,应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡,有机溶剂不能低于5%;过夜或贮存时,冲洗掉盐和缓冲液,用纯有机溶剂流动相保存(建议乙晴)。



    如何解决色谱柱使用过程中的问题?


    一.色谱峰(不对称)拖尾的原因

    1. 色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷;

    2. 柱头有污染;

    3. 样品超载;

    4. 样品溶剂不合适;

    5. 柱外效应;

    6. 化学或二次保留(硅羟基)效应;

    7. 缓冲容量不足或不合适;

    8. 重金属污染。


    二.如何解决峰形拖尾的问题

    A.与化学有关的拖尾问题

    1.流动相中,加入30mM的三乙胺(用与碱性化合物)或醋酸胺(用与酸性化合物),未

    知化合物加醋酸三乙胺;

    2.如仍然拖尾,将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);

    3.降低进样量至《1ug。

     

    B.与色谱柱有关的拖尾问题

    1.如柱头处有强保留的样品组分积聚,反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲

    醇,加1%氢氧化铵混合液冲洗,正向柱可用甲醇冲洗。

    2.使用保护柱

     

    C.与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽

    1.进样体积过大,(通常≤25uL);

    2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(适合连接管应《20cm,内径为0.007〃);

    3.检测器流通池的体积过大。


    三.如何储存色谱柱

    1.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物,做到流动相用多少配多少,或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长(一定当心其毒性和潜在的爆炸性);或在流动相中加

    20%的有机改性剂,也可抑制微生物生长,有机改性剂还有助于流动相脱气。

    2.尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂(乙晴)中,避免在缓冲溶液中保存。

    3.使用缓冲溶液后的色谱柱,应用15~20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成100%有机溶剂储存。

    4.避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。

    5.将色谱柱的两端用堵头拧好,以免柱床填料干裂。


    原文地址:http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-614.html

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